[생명Engineering Plasmid DNA preparation
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작성일 22-02-15 17:14
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Chromosomal DNA가 plasmid DNA보다 훨씬 크며, cell lysate로부터 얻어지는 chromosomal DNA가 군데군데 잘려진 linear DNA인 반면에 plasmid DNA는 covalently closed circular DNA이다.
(3) test(실험) 원리 :
Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다.
DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다.[생명공학,Plasmid,DNA,preparation,기타,실험결과
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(1) test(실험) headline(제목) : Plasmid DNA preparation
(2) test(실험) 목적 : Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid
DNA【pBlue스크립트 SKⅡ(+)】를 isolation 한다.
이 때문에 열이나 알칼리 처리 시, chromosomal DNA는 수소결합의 파괴로 인해 변성(denaturat…(생략(省略))
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설명
실험결과/기타
다. SDS는 세포막을 분해 시킬 뿐만 아니라 단백질을 변성시킬 수 있어 핵산 가수분해효소들의 작용을 억제할 수 있따 단백질들은 phenol과 chloroform을 처리함으로써 제거할 수 있따 DNA는 alcohol에 의한 침전으로 얻을 수 있따 RNA는 RNase에 의해 가수분해 되어 제거되고 최종적으로 순수한 DNA를 얻을 수 있따
Plasmid DNA의 정제는 chromosomal DNA와 plasmid DNA간의 크기와 구조의 차이에 기초를 둔다.
세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 시키며 세포막은 detergent인 SDS를 처리함으로써 분해 시킨다.
